一抗的選擇要點(diǎn)和技巧:
一、單克隆和多克隆抗體的選擇
由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合,就像導(dǎo)彈精確地命中目標(biāo)一樣。另一方面,即使是同一個(gè)抗原決定簇,在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來(lái)產(chǎn)生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中,一般單克隆抗體特異性強(qiáng),但親和力相對(duì)小,檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強(qiáng),靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過(guò)封閉等避免)。
二、應(yīng)用范圍的選擇
有的一抗只能用于 WB ( Western blotting)或免疫組化、免疫熒光、免疫沉淀等;甚至表明石蠟切片或冰凍切片。購(gòu)買抗體一定要注意你的需求是什么!
三、種屬反應(yīng)性的選擇和來(lái)源
這一點(diǎn)很重要,表明這種抗體可能存在種屬差異,且這種抗體適合檢測(cè)哪種種屬動(dòng)物體內(nèi)的抗原。
一般兔來(lái)源的多是多克隆;而小鼠來(lái)源的多是單克隆,但也有另外。根據(jù)此來(lái)源來(lái)選擇相應(yīng)的二抗。
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產(chǎn)品名稱 | FRG2B蛋白抗體 |
英文名稱 | FRG2B |
貨號(hào) | GOY-01K4306 |
別 名;FRG2A; FRG2B; FRG2C; FRG2B_HUMAN; FSHD region gene 2 protein family member B; HSA10-FRG2; Protein FRG2-like-1. 研究域;腫瘤 細(xì)胞生物 發(fā)育生物學(xué) 抗體來(lái)源;Rabbit 克隆類型;Polyclonal 交叉反應(yīng);(predicted: Human, ) 產(chǎn)品應(yīng)用;WB=1:500-2000 ELISA=1:5000-10000 not yet tested in other applications. optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user. 理論分子量;31kDa 細(xì)胞定位;細(xì)胞核 性 狀;Liquid 濃 度;1mg/ml 免 疫 原;KLH conjugated synthetic peptide derived from human FRG2B: 21-120/278 亞 型;IgG 純化方法;affinity purified by Protein A 緩 沖 液;0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol. 保存條件;Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. 注意事項(xiàng);This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. |
一抗結(jié)構(gòu):
二抗的原理及特點(diǎn):一、SABC法
原理:SABC法是利用鏈酶親和素(Streptavidin)與生物素(Biotin)特有的高度親和力這一生物學(xué)性質(zhì),先將生物素與辣根過(guò)氧化物酶(HRP)結(jié)合,形成生物素化HRP,然后與鏈酶親和素按一定比例混合,形成SABC復(fù)合物。用生物素化二抗與抗體結(jié)合,再與SABC復(fù)合物聯(lián)結(jié)形成抗原~抗體~生物素化二抗~ SABC復(fù)合物。后用底物顯色劑顯色。
特點(diǎn):該法具有靈敏度高以及低背景染色等特點(diǎn)。
二、SP法
原理:根據(jù)生物素(Biotin) 與鏈霉親和素(Streptavidin)具有強(qiáng)結(jié)合力的原理設(shè)計(jì)。在一抗(兔源與鼠源)與相應(yīng)的靶抗原結(jié)合后,生物素化標(biāo)記的抗多價(jià)二抗與一抗特異結(jié)合;二抗上標(biāo)記的生物素與標(biāo)記了辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的鏈霉親和素結(jié)合,形成抗原~特異性一抗~生物素化的二抗~HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物。
特點(diǎn):該法孵育時(shí)間短(通常為10min),靈敏度高以及低背景染色等特點(diǎn)。
三. Polymer酶標(biāo)二抗法
原理:該法采用一段多聚氨基酸聚合物作為載體鏈,將該多聚物與二抗結(jié)合,然后可再標(biāo)記上多個(gè)HRP/AP酶分子,所以同樣具有很高的信號(hào)放大作用。
特點(diǎn):靈敏度高;操作步驟簡(jiǎn)單;無(wú)需進(jìn)行內(nèi)源性的生物素封閉。
四. 直接酶標(biāo)二抗法
該法是將HRP/AP酶分子直接標(biāo)記于二抗上。因此需要普通的酶標(biāo)二抗即可完成。實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單,成本低,但是因?yàn)闆](méi)有信號(hào)放大作用,所以對(duì)很多表達(dá)豐度不是很高的抗原就可能檢測(cè)不到。
一抗和二抗的區(qū)別:
抗體就是平常所說(shuō)的抗體,即能和抗原特異性結(jié)合。
抗體是能和抗體結(jié)合的,即抗體的抗體。主要用于檢測(cè)抗體的存在。
一抗是針對(duì)抗原的抗體,二抗是針對(duì)一抗的抗體。即抗體也可以充當(dāng)抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體。也就是說(shuō),抗原進(jìn)入機(jī)體刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答,由B細(xì)胞可以產(chǎn)生與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的特殊蛋白質(zhì)。
一抗二抗都是一種可以特異結(jié)合別的物質(zhì)的基團(tuán),而且一抗可以至少結(jié)合兩種其他基團(tuán)(底物和二抗)。
一抗:可以特異結(jié)合底物,就是識(shí)別出我們想要檢測(cè)的東西。一抗和底物結(jié)合與否用肉眼是看不出來(lái)的。
二抗:可以和一抗結(jié)合,并帶有可以被檢測(cè)出的標(biāo)記(如帶熒光、放射性、化學(xué)發(fā)光或顯色基團(tuán)),作用是檢測(cè)一抗。 如果一抗自己帶有可以被檢測(cè)出的標(biāo)記(如帶熒光、放射性、化學(xué)發(fā)光或顯色基團(tuán)),則不需要二抗。但這樣成本很高,因?yàn)橐环N一抗只識(shí)別一種底物。所以如的設(shè)計(jì)一般是二抗帶上可檢測(cè)標(biāo)記,再來(lái)檢測(cè)一抗。而一抗識(shí)別底物。這樣,當(dāng)一抗結(jié)合到底物上,就可以通過(guò)二抗檢測(cè)出來(lái)。
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關(guān)鍵詞:
FRG2B蛋白抗體 FRG2B 1mg/ml
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