1. 細(xì)胞貼壁性較差,容易飄起來,37℃靜置可重新貼壁。換液時(shí)注意不要用力搖晃培養(yǎng)瓶,否則有可能會(huì)把細(xì)胞搖下來。
2. 細(xì)胞容易消化,消化下來的細(xì)胞容易成團(tuán),要吹打吹散。否則傳代后細(xì)胞會(huì)成團(tuán)生長,不均勻,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
3. 當(dāng)細(xì)胞生長至匯合率達(dá)到80~90%需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代操作,以擴(kuò)大細(xì)胞數(shù)量,維持細(xì)胞良好的生長狀態(tài)。
4. 隨著傳代的次數(shù)增加,293T細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)生長狀態(tài)下降,出現(xiàn)突變等情況。所以要在細(xì)胞購進(jìn)時(shí)就進(jìn)行大量?jī)龃,以保證實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性和持續(xù)性。
收到細(xì)胞后如何操作:1、先,觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請(qǐng)及時(shí)與我司技術(shù)支持聯(lián)系。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng),隔天再取出進(jìn)行觀察。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。
4、可將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管中,備用;細(xì)胞傳代時(shí),可以將該培養(yǎng)基按照一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合使用,讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
5、確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好后,應(yīng)及時(shí)將細(xì)胞凍存,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn),避免后期實(shí)驗(yàn)失誤可能發(fā)生細(xì)胞污染或死亡而導(dǎo)致的細(xì)胞丟失。
6、建議客戶收到細(xì)胞后3天,100X、200X、400X各拍3-5張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和我們技術(shù)支持溝通交流。
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