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詳細(xì)內(nèi)容
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
| 脊髓灰質(zhì)炎病毒1型、2型和3型檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）規(guī)格 | GOY-01P63877 | 50T |
儲(chǔ)存條件：
產(chǎn)品僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性好，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄為止定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好的定量方法，已得到全的公認(rèn)，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多域。
定量PCR方法：
a、競(jìng)爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測(cè)樣品與競(jìng)爭模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競(jìng)爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測(cè)模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測(cè)定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
北京棒桿菌磷酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體Human IRF6(Interferon regulatory factor 6) ELISA Kit小鼠粒集落激因子(G-CSF)免疫試劑盒
洋蔥假單胞菌磷酸化自噬相關(guān)蛋白4C抗體Human INPP5A ELISA Kit小鼠酪氨酸羥化酶(TH)免疫試劑盒
糞銹傘磷酸化自噬相關(guān)蛋白7抗體Human INPP5B ELISA Kit小鼠跨膜蛋白97(TMEM97/MAC30)免疫試劑盒
印度拜葉林克氏菌磷酸化自噬相關(guān)蛋白16A抗體Human INPP5E ELISA Kit小鼠克拉拉蛋白(CC16)免疫試劑盒
釀酒酵母磷酸化自噬相關(guān)蛋白9A抗體Human INPP5J ELISA Kit小鼠可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sTRAIL)免疫試劑盒
毛榛畢赤酵母磷酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體Human INPP5K ELISA Kit小鼠可溶性血小板內(nèi)皮粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)免疫試劑盒
戊糖乳桿菌磷酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體Human Importin beta ELISA Kit小鼠可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白(sTM)免疫試劑盒
7#－－-2號(hào)(網(wǎng)紋馬勃)磷酸化腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)志物8抗體Human INTS4 ELISA Kit小鼠可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體(sEPCR)免疫試劑盒
木霉磷酸化自噬相關(guān)蛋白4A抗體Human INTS12 ELISA Kit小鼠可溶性髓系觸發(fā)受體-1(sTREM-1)免疫試劑盒
溶桿菌磷酸化自噬相關(guān)蛋白4C抗體Human INTS7 ELISA Kit小鼠可溶性瘦素受體(sLR)免疫試劑盒
白金針菇—2號(hào)磷酸化自噬相關(guān)蛋白16A抗體Human INTS5 ELISA Kit小鼠可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)免疫試劑盒
楊爛皮殼蕉孢菌磷酸化蛋白激酶AKT3抗體Human INTS9 ELISA Kit小鼠可溶性肌球蛋白重鏈2(sMHC-2)免疫試劑盒
香菇磷酸化腎上腺素能受體β2抗體Human INPP5J ELISA Kit小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)免疫試劑盒
間座殼磷酸化水通道蛋白2抗體Human ING5 ELISA Kit小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)免疫試劑盒
丁香假單胞菌磷酸化自噬相關(guān)蛋白3抗體Human INMT ELISA Kit小鼠可溶性補(bǔ)體激活產(chǎn)物SC5b9 免疫試劑盒
異常威克漢姆酵母縮酶2抗體Human INO80 ELISA Kit小鼠可溶性Toll樣受體9(sTLR9/sCD289)免疫試劑盒
: T.666242資源名稱: 氏菌 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR白介素1受體拮抗劑試劑盒11-羰基-Β-乙酰乳香酸
柴油食烷菌Alcanivorax│dieselolei 質(zhì)量規(guī)格：>90%,BS白介素1可溶性受體Ⅱ試劑盒拓?fù)涮婵?/span>
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR白介素1可溶性受體Ⅰ試劑盒檀香
脊髓灰質(zhì)炎病毒1型、2型和3型檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）規(guī)格乳糖：10.0
脊髓灰質(zhì)炎病毒1型、2型和3型檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）規(guī)格乳糖：10.0
瓊脂：13.0
磷酸氫二鉀：2.0
伊紅：0.4
美藍(lán)：0.065
PH：7.1±0.2
用法：稱取本品36克，加1000ml蒸餾水,浸泡數(shù)分鐘，煮沸至完全溶解，經(jīng)121℃高壓滅菌15分鐘，冷卻至55℃，搖勻后傾注滅菌平板
質(zhì)量控制：GB/T4789.38-2008
性狀：淺粉紅色干燥粉末。易潮解。加水煮沸溶解后為紫紅色半透明液體
用途：生化研究。用于腸道致病菌的分離，亦可用于大腸埃希氏菌的分離和鑒別
保存：RT
關(guān)鍵詞：脊髓灰質(zhì)炎病毒1型 2型和3型檢測(cè)試劑盒 熒光PCR法
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