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詳細(xì)內(nèi)容
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
| 豬托克特諾病毒1型（豬細(xì)環(huán)病毒1型）染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格 | GOY-01P63549 | 50次 |
儲(chǔ)存條件：
產(chǎn)品僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性好，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄為止定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好的定量方法，已得到全的公認(rèn)，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多域。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測目的。
黃芩苷(95%)英文名稱： lurium standard糖蛋白C抗體包裝1g
黃芩苷(標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Thulium standardγ氨基丁酸運(yùn)載蛋白1抗體包裝5g
黃芩素英文名稱： Vanadium standardGATA結(jié)合蛋白2抗體包裝1g
黃芩素（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Vanadium standard生長休止特定蛋白7抗體包裝5g
黃藤素英文名稱： Ytterbium standard磷酸化谷氨酸受體1抗體包裝1g
黃芫花（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Ytterbium standardG蛋白偶聯(lián)受體116抗體包裝25g
黃楊堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Zinc standard鳥苷酸調(diào)節(jié)蛋白12抗體包裝5g
黃鐘花醌;拉帕 (標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Zinc standard磷酸化膠質(zhì)纖維酸性蛋白抗體包裝1g
灰氈毛忍冬皂苷英文名稱： Sodium dodecylbenzenesulfonate solution磷酸化G氨基丁酸B型受體2抗體包裝250mg
灰氈毛忍冬皂苷乙（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Sulfamethizole磷酸化G氨基丁酸B型受體2抗體包裝1g
茴芹內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Diphenyl sulfone生長分化因子10抗體（TGF-β超家族10）包裝25g
茴香腦英文名稱： DimethoateG蛋白偶聯(lián)受體LOC51210蛋白抗體包裝5g
茴香酸對(duì)羥基苯乙酯英文名稱： Dicofol standard solution生長抑制蛋白34包裝1g
火麻仁（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Dicofol standard solution生長激素抗體包裝25g
火炭母（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： DiniconazoleGDP甘露糖焦磷酸化酶抗體包裝5g
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：含量測定脫氫酶7家族,成員A1試劑盒蒲公英甾;Taraxasterol
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>98%,二合物可用于培養(yǎng)糖還原酶試劑盒派立辛;Parishin
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：含量測定縮酶試劑盒歐夾竹桃苷;Oleandrin
豬托克特諾病毒1型（豬細(xì)環(huán)病毒1型）染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格香豆內(nèi)酯；1,2-苯并哌哢；氧雜萘鄰?fù)�；鄰氧萘酮；苯并鄰氧芑酮�?,2-苯并吡喃酮；2H-1-苯并吡喃-2-酮
豬托克特諾病毒1型（豬細(xì)環(huán)病毒1型）染料法熒光定量PCR試劑盒規(guī)格香豆內(nèi)酯；1,2-苯并哌哢；氧雜萘鄰?fù)�；鄰氧萘酮；苯并鄰氧芑酮�?,2-苯并吡喃酮；2H-1-苯并吡喃-2-酮
Coumarin
其他 1,2-Benzopyrone；5,6-Benzo-2-pyrone；cis-o-Coumarinic acid lactone；Coumarinic anhydride；Tonka bean camphor
產(chǎn)品規(guī)格： 高純，98%
包裝：100克/500克
CAS號(hào)：91-64-5
別：High purity grade
含量：≥98.0%
熔點(diǎn)：68～70℃
乙醇溶解試驗(yàn)：合格
灼燒殘?jiān)?le;0.1%
性狀：無色斜方或長方晶體或粉末。有香莢蘭豆香，有灼燒味，味苦。溶于乙醇、、揮發(fā)油和氫氧化堿溶液中，微溶于沸水。相對(duì)密度(d204)0.935。熔點(diǎn)68～70℃。沸點(diǎn)297～299℃。閃點(diǎn)162℃。中等毒，半數(shù)致死量(大鼠，經(jīng)口)293mg/kg
用途：生化研究。熒光指示劑。香豆素是于1820年在黑香豆中發(fā)現(xiàn)的。香豆素以苷的形式存在于許多植物中。具有黑香豆的濃重香味，亦具有新刈草甜香及巧克力氣息，留香長久。新鮮的干草香氣在很大程度上是由于在干燥新刈草過程中，苷在發(fā)酵分解時(shí)生成并釋出香豆素所引起的。香豆素用于制造香料，常用在配制新刈草型及馥奇型香料。以及紫羅蘭、葵花、素心蘭、山楂花、蘭花、薰衣草等香精中。它和香蘭素一起可用于糖果、糕點(diǎn)之類有調(diào)味，加入煙草中可以增加天然香味。在鍍鋅（或鎘、鎳）的電鍍液中加入香豆素，可減少鍍層起孔，增加光亮度。香豆素是制造其他香料和多種其他化學(xué)品的原料。香豆是一大類衍生物的母體
保存：RT，避光
操作流程:
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
關(guān)鍵詞：豬托克特諾病毒1型 豬細(xì)環(huán)病毒1型 染料法熒光定量 PCR試劑盒
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